Apéndice: Prueba de lavado de semilla para detectar carbón, tizón u otros patógenos

Esta prueba sirve para detectar la presencia de esporas de carbones, conidios de hongos imperfectos y oosporas, ya sea en semilla contaminada o semilla asintomática.

Coloque una muestra de 10 o 20 gramos en 100 ml de agua con 2-5 gotas de Tween 20 y licue durante 30 minutos a una velocidad de 250-300 rpm (si no hay Tween, se puede usar una gota de detergente líquido). Filtre el agua del lavado en tamices de 50 y 20 µm. Las esporas y los residuos grandes quedarán atrapados en el tamiz de 50 µm, y las teliosporas de Tilletia indica, cuyo diámetro promedio es de 25-40 µm, en el de 20 µm.

Enjuague el tamiz con una pistola de agua y recoja el agua en un vaso de precipitado. Pase el agua a través de un papel filtro Whatman #1, colocado en un embudo Buchner que se inserta en un matraz conectado a una bomba aspiradora. El papel filtro Whatman #1 retendrá todas las estructuras menores de 20 µm.

Después de filtrar el agua, humedezca el filtro con unas gotas de una solución de KOH al 3% y examine microscópicamente para detectar la presencia de esporas. Señale cualquier estructura extraña y examínela con un microscopio compuesto.